病毒的濃縮和純化
收集發病鵝的脾臟、肝臟和腎臟,均漿用1:5稀釋(Wt/vol)buffer A (10 Mm Tris-HCl ,100mM EDTA PH=7.2)離心10000 轉,30分鐘。再加上雙抗(10000LU/ML)青霉素和鏈霉素(1mg/ml)。
病毒濃縮的方法用的是蔗糖梯度離心方法。
shou先,10000轉離心30分鐘,收集上清液,用三氯三氟代乙烷純化兩次為了除去脂層。蔗糖溶液用在下一步的操作中,提前準備buffer A。上清放于30%的蔗糖的溶液中超速離心。上清重新用buffer A懸浮,放于25%-60%的不間斷的蔗糖溶液中,超速離心120000轉,16小時。離心完后,收集密度差別的液體。測定病毒的浮力的密度。**后,分離的液體帶再用1:3 buffer A稀釋,離心2小時,120000轉。病毒小顆粒用懸200微升水。